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SD大鼠肝內膽管上皮細胞,使用方法

發布時間:2019-08-22   點擊次數:1295次
  SD大鼠肝內膽管上皮細胞,使用方法;
 
  1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
 
  取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態,然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。
 
  2、細胞傳代:
 
  1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
 
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
 
  3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
 
  4)待細胞*貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。
 
  3、細胞凍存:
 
  1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
 
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
 
  3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
 
  4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
 
  4、細胞復蘇:
 
  1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
 
  2)將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
 
  3)棄上清,沉淀用5ml*培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
 
  4)第二天,換用新鮮*培養基繼續培養。
 
  SD大鼠肝內膽管上皮細胞,細胞傳代:收到細胞后,請對細胞培養瓶外表進行消毒,將細胞置于培養箱中進行 1-2 小時的緩沖,待細胞恢復基本生長狀態后,進行后續細胞實驗。在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
 
  (一)細胞未長至 85%時,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,若培養瓶上無特殊標注,吸去剩余培養液,只留 6-8ml 培養液繼續培養。
 
  (二)細胞已長滿(達 85-95%)。即可進行傳代,具體步驟如下:
 
  1.棄去培養液,用 PBS 洗滌 1-2 次,
 
  2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞回縮變圓、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落,則迅速拿回操作臺,加入雙倍的含 10%血清的*培養液,終止消化并輕輕吹打細胞,使其變成單細胞懸液,
 
  3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min,棄上清,輕彈管底,將細胞彈散,
 
  4.加入新鮮培養液重懸細胞,進行傳代、凍存,
 
  5.如果沒有特別說明,建議收到細胞后的次傳代比例為 1:2。
 
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